色譜柱基本上是每個(gè)實(shí)驗室的一種實(shí)驗室耗材,當使用效果已經(jīng)無(wú)法滿(mǎn)足實(shí)驗需求的時(shí)候,就需要考慮更換新的色譜柱了。
那么如何判斷更換新色譜柱的時(shí)間呢?
(1)使用壓力、分離度和峰形的混合指標來(lái)考察一根色譜柱的狀態(tài)。
壓力的測量是最容易的,通常我們確定的色譜方法要滿(mǎn)足以下的要求:用新柱子時(shí)柱壓不高于2500psi,在任何情況下壓力都不超過(guò)3000psi。有統計表明,超過(guò)60%的色譜柱損壞是由于壓力過(guò)高的原因。
分離度是考察色譜柱的一個(gè)非常重要的指標,只要兩個(gè)組分可以獲得基線(xiàn)分離,對該分析物的定量就不會(huì )有什么問(wèn)題。對于對稱(chēng)的高斯峰來(lái)講,1.5的分辨率即可得到基線(xiàn)分離;若Rs在1.7至2.0之間則更好。若峰拖尾嚴重則需要更高的分辨率。使用分辨率作為色譜柱的評價(jià)指標的好處在于我們可以直觀(guān)地看到相鄰的峰的分離情況。
(2)另外一個(gè)考察色譜柱質(zhì)量的標準是峰形拖尾情況。
廠(chǎng)家測試報告的峰形都非常漂亮,但這并不代表該色譜柱分析實(shí)際樣品的情況。通常,在開(kāi)發(fā)分析方法的過(guò)程中,一般會(huì )試驗幾根色譜柱,分析足夠多的實(shí)際樣品,就知道當分離變差時(shí)是什么樣的情況。